本研究包括三大类:(1)无症状LHON变异载体,(2)LHON受影响的病人和(3)控制对象LHON患者视线按疾病持续时间划分四级类,如前所述:初级子推级(故障持续时间 <3个月)、晚分治阶段(3-6个月)、动态阶段(6-12个月)和慢性阶段(>12个月)。 ¹²LHON载运物和病人由IRCCSIstitute Neurologiche di Bologna医院、Bellaria医院、Vita-Salute大学、IRCCSOspedale San Raffaele医院和Parma大学医院检查LHON诊断在博洛尼亚ISNB神经元学实验室得到分子确认从接受常规眼科检查的门诊中招聘控制程序,并依据下列兼容性标准:过去和当前正常眼科检测结果、内部压力排除标准所有参与者为ametropia>3二极管,光学介质的重大误差(例如LOSS-III等级###2,斜光盘、糖尿病元数、无控动脉高压定义为systoli血压>150毫米汞和/或异性血压>100毫米汞和神经分解性疾病,如ASerphits或Parkinson病没有一个病人或载体具有多分解和/或磁共振成像特征

所有参与者都接受神经学和眼科综合测试,其中包括自失能度量法、最优校正视觉敏捷度评估(BCVA),该评估包括诊断性视敏度研究图表标准早期处理、滑动感应测试、IPP测量、血压测量、OCT、LSFG和Color Fundus摄影研究经相关中心伦理委员会批准,参与者根据《赫尔辛基宣言》解释研究性质和可能后果后表示知情同意18岁以下未成年人获得父母知情同意

素山详细描述LSFG原理 ¹⁵主输出参数被称为平均模糊率(MBR),用任意单元表示,并显示线性与动物研究中的绝对ONH毛细流相关 ^{21号 , 22号}在这次调查中,我们使用商业上可用的LSFGRetFlow单元(Nidek公司、LTD公司、Aichi公司和Japan公司),由Fundus摄像头组成,配有830-Nm二极管激光机和数字电荷相联设备摄像头设备装有目视跟踪器和内外部定点目标LSFG测量显示临床研究高可复制性 ^{23号 , 24码}一次LSFG扫描由118图像组成 速度为30赫兹约4秒最新版LSFG解析软件SoftCare,Fukoka,Japan)用于分析软件版本特征增强清除人工品(例如粗软浮点或视轨误差)。经验丰富的运算符获取2次ONH扫描所有扫描都经过内部质量检查,由供应商提供所有检查均在非边缘条件下进行,介质室照明半自动化绘制兴趣区以匹配ONH边界,并参考前文描述的颜色fundus照片 ^25码ROI内部均值渗入ONH微流水器(称为MT)使用软件自动化分解工具计算双扫描平均数基准生成的ROIs在后续扫描中重新使用LSFG图像和颜色fundus照片实例显示 图1.光盘区测量像素数LSFG磁盘面积用像素测量,显示与磁盘面积中度至强度相关关系,用Fundus摄像头在健康日文题下拍摄的放大校正图片测量 ²⁶

光神经和maculaOCT扫描用CirrusHD-OCT获取(软件版7.0.2.5CarlZeiss Meditec公司,都柏林CARNFL外界和内核层内部界间交错细胞层+内分解层的厚度和厚度分别通过ObjectiveDuc Cube200x200协议和Macel512x128协议测量 ^27号

分类数据按绝对和相对频率显示,数值变量则按中位数和内分数范围显示由多变量线性混合效果模型对年龄、性别、球等效、磁盘区、组和级疾病对MT、RNFL厚度和GCIPL厚度的共同效果进行了检查,参与者和眼睛类随机效果嵌套(考虑到跨子关系和重复测量)。结果显示为有限似然线性效果估计,并配有似似然置信区间 P级赛德斯威特法值球形等值列作共变法部分补偿因轴长度个人差差而放大从理论上讲,MT不应受视距放大作用影响,因为它是光盘边界内平均流值,然而,我们应用校正法是因为从以前的研究看,MT与轴长度是否有关联并不清楚 ^28码所有分析均在R免费软件环境内完成A级 P级值 < 0.05被认为具有统计意义

LHON十大变异载体中的十九双眼(5名男性和5名女性)、LHON八大无关男性患者的15双眼和40控件中的40双眼(21名男性和19名女性)都包括在研究中。分子诊断LHON载波和病人报告 表1. 补充表S1详细列出每个病人的临床、个人和家庭历史LHON所有患者双目相继受到影响,但MT-ND6基因微值m.14484T>C的一位患者除外,他从次端插入一眼,特征是RNFL和GCIPL无症状点稀疏,因此该眼睛被排除在研究之外。7名受LHON影响的病人至少接受2次检查:基准从疾病发端中位间隔4个月(范围=5天至11个月),后续访问3.5个月(范围=2至13个月),与基准访问同时进行,以避免光盘流变化的影响 ²⁹参与者计量汇总 表2并用图形表示框图 图2.RNFL厚度和GCIPL渐渐变薄 P级=0.004对两者都有效,而年龄对MT的影响略微无关重要 P级= 0.055磁盘面积增加后MT趋向下降(尽管统计意义不大)( P级= 0.057 表3组间比较按年龄、性别、球等值、磁盘面积和同题双眼间相关关系校正RNFL厚度、GCIPL厚度和磁盘面积值高于控件值 P级=0.018 P级=0.003和 P级= 0.011),而MT两组间没有差别 P级= 0.936

初级子级LHON双目MT和RNFL厚度比控件高 P级<0.001和 P级=0.001MT下降值低于控件晚子级值 P级= 0.024,而RNFL厚度在动态阶段晚于控制时下降 P级< 0.001)GCIPL受影响病人厚度比受控者低,独立于疾病阶段 P级< 0.001)受LHON影响的病人磁盘区与控件区差别不大 P级=0.186

图3图形显示LHON受波视时MT、RNFL厚度和GCIPL时间演化标准偏差数高于或低于控件平均值)与上表量化结果一致,局部多元回归平滑平均值显示,初始子级MT比正常值高,后比RNFL厚度下降速度更快

本研究的关键发现是,LHON患者自临床发作起3个月内光盘显示高流血,LSFG参数MT表示出高流血高MT可被视为LHON诊断研究中的临床实用标志,特别是考虑到LHON病情特征相对稀疏假设至少三种非相互排他机制引高MT一种可能性是线粒体失灵触发局部响应 特征为补偿性通战氧化亚粒子释放可能卷进血管变异中,结果可能出现伪天花状态,原因是红气体持续线粒体失效,最重要的是他们的斧子受伪表膨胀的影响。 ^{一号 , 2}后一种假设有多种解释,一种假设是xonal流恒定,补偿性吞没扩散mitocordria况且,我们不能排除ludealate毒性,如LHON单片前文所记录 ^{30码 , 31号}另一种可能机制可以是开机显微分解与所谓的“压缩假设”一致,ONH内部因分片综合症增加压力放大分离机制都适合前次报告的极毛虫染色 ^32码第三个可能性是,LHON发生的局部事件受RGC功能特性和解剖约束驱动,似似像SLE事件,特征特征为mitechdrial脑部病理学、像Serphais综合症 ^三十三多稀有LHON变异还可能导致MELASpheno ^34号LHONOH所发生事件很可能与MELAS所见事件并行,

高血流似乎能描述早期子粒子疾病阶段的特征,另一方面,我们没有发现无症状载体和控制器之间大相径庭的MT值得注意的是,我们数列中的载体不一,包括青年男女老少,因此可能表示偏向,因为年龄/性别偏向疾病转换虽然本研究不支持LHON载量整体存在异常光磁流,但不可排除光磁流调节可能是对载体某些子类进行线粒机能失灵的一种补偿机制此外,在代谢压力条件下测量血液流,如闪光刺激时,可能显示LHON载波和控制有差 ^18号需要进一步研究测试在视觉损耗前前端阶段发生MT增量

光盘血液流可能对转换风险有影响,如先前假设的那样 ^35码在这方面,一个有趣的假设是,血液流减值可能是一个机制,通过它吸烟触发转换 ^36号慢性吸食被认为会导致眼部血管机能失常 ^37号并损耗线粒生物生成补偿激活 ^36号两种机制都可协同提高ONOH缺能阈值并方便向冒烟者转换

下一步分析受LHON影响的病人纵向结构流参数和流出参数结果表明GCIPL厚度优先降低到正常值以下MT和RNFL厚度显示相似趋势,初级子级高值并逐步下降MT比RNFL厚度提前下降到平均正常值Axonal Stasis、imochondrial生物生成和随后缓冲axal清除过程可能导致GCIPL稀释和流出后RNFL延迟稀释 ^{4 , 6}

我们确认研究中存在一些局限性第一,相对小样本大小第二,LSFG技术固有限制,如深度解析不足oH结构变化可能确实会影响激光穿透性,尚不清楚视网膜或后院动脉提供动脉对信号作用的程度 ^21号当前内部分析软件也有一定限制诚然,尽管MT计算本身涉及减大型容器,但有时发生部分这些容器不减,特别是当它们的流血相对较低时。未来自动化分割算法基于结构数据(例如而不是MBR本身可进一步改善光盘微流体与大容器之间的区别,以便分别分析这些显性(虽然非独立)光盘动构件第三,不纠正图像轴长度差是一个限制因素,因为RNFL测量方法在每个对象的不同视点拍取,GCIPL厚度整合在不同主体的不同视点区域上 ^38号因缺轴长度测量方法,我们应用基于球形等值的校正方法,但在提取量化数据前需校正横向比值,以更精确地补偿视距放大法缺OCT-A数据是本研究的另一个限制OCT-A和LSFG综合提供补充信息并识别LSFG和OCT-A一致性可提供更多证据证明光盘溢出为LHON诊断和监测提供有前景生物标志OCTA允许深度解析到毛细层,但无法量化溢出反之,LSFG提供量化溢出量,但无法解决单个毛细层和前OCT-A发现 ¹²高渗透性视网膜密度与光盘高流相关联微镜感知器是LHON独有特征,与缺化学或炎症神经病理相对照LHON中该特征的作用尚不为人知,我们可以假设其在承载器中的潜在补偿作用及其在转换为全发性疾病时起催化作用

概括地说,本研究首次比较光盘流血动态、RNFL厚度和GCIPL厚度LHON初级阶段和无试LHON载波数据显示OH组织基本正常混入无症状LHON载波中,而在患病前3个月的病人中,我们观察到OH高溢出下降到下一阶段向慢性病下降溢出血液流动态与RNFL厚度相似,尽管MT显示高比正常值高,继而下降幅度更大深入纵向研究将LSFG与OCT-A整合起来,可能有助于进一步澄清LHON的发源性,说明微机感知和流血的作用

光盘血液流用LSFG测量可成为LHON诊断和监测的有前途生物标志器,并成为评估对治疗响应的客观结果尺度

作者感谢Jacqueline Chua和Kenji Okamoto的宝贵评论和建议,Michele Cervi、Ricardo Ferraris de Gaspare和Paolo Castagnoli技术支援和Leonardo Caporali遗传测试

G.C.由Diana Davis Spencer临床研究奖支持

披露: G.Calzetti无; C.La Mogia市无; M.Catneo无; A.卡塔市无; F.波塞洛无; G.阿摩尔无; M.卡波内利无; M.L.卡卡维拉无; S.甘道夫无; V级卡雷利无; L.修饰器无; H.P.N.舍尔无; P.巴波尼,无