2016年7月
第57卷第9期
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文章编程 2016年7月
显示视网膜全场光一致性Tomgraphy
凯特格里夫 ; OlivierThovenin ; 阿比谢克森古普塔 ; 文森特M边疆 ; 米歇尔派克
作者关联注解
  • 凯特格里夫
    Quize Vingts国立Ophthallogy医院,法国巴黎
    视觉学院UPMC巴黎大学06
  • OlivierThovenin
    Langevin学院,法国巴黎
  • 阿比谢克森古普塔
    视觉学院UPMC巴黎大学06
  • 文森特M边疆
    Quize Vingts国立Ophthallogy医院,法国巴黎
    视觉学院UPMC巴黎大学06
  • 米歇尔派克
    Quize Vingts国立Ophthallogy医院,法国巴黎
    视觉学院UPMC巴黎大学06
  • 通信号:KateGrieve视觉学院Centrie Nactald'Ophallogy desQuize-Vingts,17rue Moreau,75012Paris kategrieve@gmail.com.
视觉科学调查 2016年7月vol.57OCT96-OCT104多伊:https://doi.org/10.1167/iovs.15-18856
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      KateGrieve、OlivierTowvenin、AbhishekSengupta和VincentM边界人 米歇尔派克斯显示视网膜全场光一致性Tomgraphy投资公司Ophthalmol大学维斯科学文献2016;57(9):OCT96-OCT104.多伊:https://doi.org/10.1167/iovs.15-18856.

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      ARVO(1962-2015)作者群(2016-present)

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抽象性

目标:解释全场光学一致性摄像头前视网膜

方法论:平面视网膜使用FFOCT图像显示人型、灵长类、猪类、绵羊类、鼠类和鼠类组合FFOCT、荧光聚合显微镜和荧光FFOCT综合分析固定样本Tuj1和Brn3a或试管贴绿色荧光蛋白测试死后组织变化 时间序列生成超过48小时 并用新鲜组织对固定组织

结果:FFOCT使用单片类型和特征如神经纤维捆绑和RGC声波解析不使用1-mxyz分辨率对比物代理大型哺乳动物交错细胞层细胞声波显示以暗轮廓为主亮度,而鼠类细胞声波显示以亮轮廓为主暗暗度RGCaxon至sma交叉点可追踪三维图像栈时间序列显示视网膜组织样本超过48小时未标定,尽管没有检测到单细胞退化情况,而半甲状腺固化则增加散射和缩缩

结论:全场OCT显示视网膜微分光不使用对比物代理我们观察了GCL声波特征的物种间差定型显著改变视线透明性,从而减少显微镜特征可见性

全场光学一致性透视或显微镜 一号,2可变光一致性断层摄影 3过去十年开发出细胞分辨率图像 深度前活组织标本不使用对比物曾用于视网膜成像 4角膜 5-7角形肢体 8伟德国际官网网址以及其他眼组织 以及其他生物组织如脑 九九胸口 10,11伟德国际官网网址胃肠组织 12
FFOCT中不需要定型和对比物代理物是一种优势,特别是在纵向研究中,例如单视距前置像多点伟德国际官网网址然而,为消除FFOCT特征识别中的模棱两可性,有必要使用其他技术与同类组织图像相关联。荧光标志使用流体显微镜识别不同细胞类型、轴和血管Forecores-FFOCT提供精确溢出流频和FFOCT图像并存于一个多式工具中当前研究试图将FFOCT图像与FCM图像和FOCT图像连接起来,以便识别FFOCT所见视点特征并监测这些特征随时间推移和固定后的变化
方法论
伟德国际官网网址组织
伟德国际官网网址人体组织.
人体眼球从外科学校获取,协议经外科学校和Quinze Vingts国立Ophalmory医院机构审查委员会批准Globals从死后不到48小时清除并用CO运输 2免费介质(Gibco,LifeTechnology,Warrington,UK)从外科学校到Quize Vingts国立Ophallogy医院分解视网膜图像清新并沉浸神经波A介质(Gibco,LifeTechnology)。检测5个视网膜标本(平均80岁,范围63-95岁)。样片一二来自外围视网膜位置的小样本,标本三环绕视神经,标本四五宽组织带包括macula和光神经样本解剖成平面直接FFOCT样本持有者(即自由浮动而非嵌入玻璃或膜支持)并轻度固定在盖状成像下
伟德国际官网网址动物组织
所有动物操作均获昆氏国家眼科医院和区域审查局批准(CPPIle-de-FranceV),并依据ARVO词形学和视觉研究使用动物声明执行
九头猪和四只绵羊眼球从私营研究设施取出并用PBS传送到View Institute六大视觉球从伙伴研究设施获取并传送到View Institute二大鼠Long-EvansJanvier实验室,LeGenest圣岛,法国)和14鼠标C57BL/6,Balb/calbino和AuburnJanvier实验室从视觉学院动物设施获取眼睛取出前端段,全厚视网膜与视色膜和合金完全完整相仿,或视网膜分解光受体外段层,将RPE和合金从图像中排除视网膜样本或直接安装FFOCT样本持有者或坚持膜支持转移FFOCT样本持有者,浸入二-免神经盘介质中,并缓缓停置FFFOCT成像
成像技术
全场光一致性托马
全场OCT 一号,2传统OCT变量 3二维(2D)脸像摄入相机中,三维(3D)数据集可按深度扫描获取白光源配置使用比常规OCT高轴跨段分辨率不需要反比代理物,因为反比完全自生全场OCT因此可以在新鲜或固定前生物组织样本中执行三维成像非渗透性视网膜中FFOCT可实现1m新架或固定架组织成像 3解析度(即显示细胞细节像组织学,但不切片或染色组织)
FFOCT系统(LLETECH,法国巴黎)前文已有描述 7光素源提供光素,短一致性长度通向轴分辨率1m全场照亮并用辅助金属氧化半导体摄像头摄取图像插图臂搭配Linnik配置中的显微镜目标x10目标沉浸0.3数值孔径通向1.6m渗透深度取决于组织内容和透明度,视网膜约200微米宽场图像可自动与直径达25毫米图像样本相匹配显示,或深度图像栈可捕捉2x2毫米 2mondod字段不到5分钟内捕捉,2200mx1mmx1m3D栈也不到5分钟内捕捉
流水分显微镜
荧光共振显微视图组织内贴有荧光标签特征激光扫描FCMOlympus,Rungis,法国)用于图像定位人视网膜标本图像栈覆盖百米深度20步
Fluorescence-FFOCT.
FFOCT显示组织结构,多亏它由反射光生成的固有对比值,FCM提供具体细胞类型或标签特征信息,而两者相关则需要FFOCT成像过程中对组织进行谨慎处理和定位,随后是荧光标签和标本安装过程,其次是FCM成像,加上绘制大区图所需的耗时扫描,以便能够识别可用作显微特征路标的宏特征过程多步表示最终关联有一定程度的不精确性,因为在细胞间两种不同显微技术之间的图像叠加极具挑战性。理想选择是使用多式成像系统提供FFOCT和荧光信道像素对像素相联使用法国巴黎Langevin学院最近开发的原型FOROCT显微镜对比先前FFFOCT搭建 13,14在此设置中, 荧光与FFOCT测量同时获取, 表示图像捕捉速度更快简言之,这种搭建方式与传统FFOCT相似,但加蓝光二极管M470L2650mWThorlabs 牛顿NJ 美国)中心470nmThorlabs高压氟磷双光束合并并聚焦样本中,检测路径中FFOCT和荧光信号用单边缘分解布莱特林市Semrock市Rochester市美国纽约市) 并被两台摄像头捕获 CMOSPhotonFocus,Lachen,Service使用FFOCT图像和科学CMOS5.5PCO.GEKelheim摄像头前安装更多滤波器以确保双路独立光学路径切入组织FFOCT和荧光信道并行时,FFOCT和荧光摄像头同时捕捉相同样本区域数值孔径0.8近红外浸水显微镜目标x40(法国巴黎Nikon)产生220x220m和像素采样210Nm像素全场OCT图像捕捉时间为3ms,框架速率为每秒100图荧光通道仅显示一图像,曝光量500ms
荧光标签
关于FCM,视网膜细胞类型识别全机免疫测试简言之,在固定4%PFA为1小时后,细胞被渗透阻塞0.5%Triton X-100,0.25%tween和PBS-BSA5%为1小时室温1小时Chemicon,Billerica,MA,USA)和反Brn3a抗体(1:100!R&D系统Minneapolis MNEDIODOLEDER视网膜标本的一部分用PBS嵌入而非主抗体作为负控件
光学视网膜细胞在体外贴上粒子介导快速基因传绿色荧光蛋白赫利奥斯基因枪系统(Bio-Rad、Hacels、CA、USA)用于macque视庭外移植粒子介导急基因转移,类似于前文所描述的 15简言之,10mg金微载体生物光标涂20微米编码CMV:CatCh-GFP基因枪桶悬浮5毫米视网膜前移植(RGC面对桶),粒子子弹按110psi压推送出厂在37摄氏5%CO 23至4天后基因转移
图像采集分析
FFOCT视网膜图像定性评估
全场OCT脸部图像视网膜组织标本分析视像组织取向取宽场图像并发和3D图像栈推导出,视像栈视距估计基础是宏观可识别特征的位置(如光神经元和macula),并同时考虑图像栈可见的微镜特征(如细胞和axon密度与光神经或macula距离相关、容器结构)。伟德国际官网网址基于这些观察结果,组织分解成小片以备荧光标签使用,并视FFOCT视图中被认为最有趣的特征而定,将每片标签特征组合
FFOCT与FCM和FFOCT相关
荧光标签后,标本安装在显微镜幻灯片上两个覆盖页间并定位同视网膜用于FCM成像时相同方向查找相似微博区时,用船只等毛解剖特征来估计FFOCT和FCM之间的相联图像栈位置
流频-FFOCT及其本地化流频和FFOCT信道自动保证流频和FFOCT信号与单像素尺度的精确关联
组织变质时间
FFOCT使用自动图像捕捉软件(LLTETch)获取图像栈三样边缘视网膜,48小时时数进取时点图像从质量上比较 密度剖面图在每个时点都绘制
组织变换归定型
以新灵长类视网膜摄像后,在样本持有者中添加了4%仿真膜,不取代视像样本图片栈获取30分钟后添加固定位置与组织清新时获取的栈相同新组织与固定组织之间的质和量比较都有可能实现,方法包括考虑图像外观并绘制生成剖面图像强度剖面图以评估新鲜状态与固定状态之间的强度、厚度和对比变化
结果
神经飞视网格图层
人视网膜中可辨别交错细胞层中的axon捆绑和细胞体,并评价视网膜不同位置的不同分布和密度 图1显示四个图像捕捉点从macula向外围沿中位raphe近轴运行,macula周围稠密轴和小密室渐渐稀疏近外围,轴对准中位raphe和细胞体变大神经纤维和细胞密度可以从这些图像中评价,而细胞类型识别要么为RGC,要么为acrine细胞群FFOCT图像通过放大面部和剖面视图可辨别出细胞声波个体ax 微博2, 补充电影S1特别是当它们从神经纤维捆绑中分离单轴直径接近FFOCT解析限值,这意味着当捆绑时难以单个解析识别单细胞体也需要时间,因为它需要人工跟踪轴从三维图像栈中流出 见补充电影S1)
图1
中位raphe人全场OCT图像人视网膜 第二题fundus显示raphe中位区域从macula到外围一四表示NFL行近似区c列GCL比例栏:50微米
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中位raphe人全场OCT图像人视网膜 第二题高山市 a/fundus显示raphe中位区域从macula运行到外围一到四表示长相图列近似区 b/NFL行(行) C级GCL 尺度栏:50微米
图1
中位raphe人全场OCT图像人视网膜 第二题高山市 a/fundus显示raphe中位区域从macula运行到外围一到四表示长相图列近似区 b/NFL行(行) C级GCL 尺度栏:50微米
中位raphe人全场OCT图像人视网膜 第二题fundus显示raphe中位区域从macula到外围一四表示NFL行近似区c列GCL比例栏:50微米
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图2
人类视网膜交错细胞轴声广场人神经纤维层2级块:500微米FFOCT图像缩放二米厚ax比例条数:50微米补充电影S1显示轴3D
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人类视网膜交错细胞轴声高山市 a/广场人神经纤维图二 尺度栏500微米高山市 b/FFOCT图像缩放二米厚axon 箭头切换交错细胞声学并用连续2微米深度步 C级交叉单元格xon长度 缩放栏:50微米 补充电影S1显示三维内此题axons跟踪
图2
人类视网膜交错细胞轴声高山市 a/广场人神经纤维图二 尺度栏500微米高山市 b/FFOCT图像缩放二米厚axon 箭头切换交错细胞声学并用连续2微米深度步 C级交叉单元格xon长度 缩放栏:50微米 补充电影S1显示三维内此题axons跟踪
人类视网膜交错细胞轴声广场人神经纤维层2级块:500微米FFOCT图像缩放二米厚ax比例条数:50微米补充电影S1显示轴3D
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一种替代方法识别被视为RGCsmas的细胞体使用荧光标签或与FFOCT相仿新组织样本相仿或与FFOCT相仿体外标样本同步获取FFOCT和流频信号并发
图3a和 3人类视网膜图象与FFOCT并发并发FCM 微博3Brn3a标签仅RGC核 微博3b) 图3显示带荧光-FFOCT获取的图片macque视网膜与体外GFP标签
图3
全场OCT和FCM人文和FFFOCT灵长类全场OCT(左侧)和FCM(右侧)人类视网膜图像,主题三稀疏轴和细胞可见度高反射结构FFFOCT(左侧)和类似区域FCM标签Tuj1(红外)高密度打包细胞离光神经近处,该神经元、神经纤维和卷心机可见像FFOCT高反射结构(左侧)和FCM相似区域(右侧),并用Brn3a标注反射细胞核全场OCT组合Force-FFOCT中位和频频图像-GFP标签RGC视网膜实战使用Forecence-FFOCT并用像素套接比例条数:100微米
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全场OCT和FCM人文和FFFOCT灵长类高山市 a/, b/全场OCT 左转和FCM 右转人视网膜图像第三题高山市 a/稀疏轴和细胞外围可见FFOCT超反射结构 左转类似区域FCM标签Tuj1 红色标签轮廓和acrine细胞声调和axons高山市 b/高密度打包细胞离光神经近处可见FFOCT超反射结构 左转和FCM相似区域 右转交错细胞核贴上Brn3a标签 红色)高山市 C级全场OCT 左转混合荧光-FFOCT 中心点和荧光 右转GFP标签的RGC视网膜直播图像使用流频-FFOCT和像素叠加 缩放栏:100微米
图3
全场OCT和FCM人文和FFFOCT灵长类高山市 a/, b/全场OCT 左转和FCM 右转人视网膜图像第三题高山市 a/稀疏轴和细胞外围可见FFOCT超反射结构 左转类似区域FCM标签Tuj1 红色标签轮廓和acrine细胞声调和axons高山市 b/高密度打包细胞离光神经近处可见FFOCT超反射结构 左转和FCM相似区域 右转交错细胞核贴上Brn3a标签 红色)高山市 C级全场OCT 左转混合荧光-FFOCT 中心点和荧光 右转GFP标签的RGC视网膜直播图像使用流频-FFOCT和像素叠加 缩放栏:100微米
全场OCT和FCM人文和FFFOCT灵长类全场OCT(左侧)和FCM(右侧)人类视网膜图像,主题三稀疏轴和细胞可见度高反射结构FFFOCT(左侧)和类似区域FCM标签Tuj1(红外)高密度打包细胞离光神经近处,该神经元、神经纤维和卷心机可见像FFOCT高反射结构(左侧)和FCM相似区域(右侧),并用Brn3a标注反射细胞核全场OCT组合Force-FFOCT中位和频频图像-GFP标签RGC视网膜实战使用Forecence-FFOCT并用像素套接比例条数:100微米
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图4鼠视网膜显示相似图像,Tuj1标签识别轴状电流、轮廓和acrine细胞分布于两个不同的视网膜位置 金字塔4C 4e)
图4
鼠视网膜FFOCT和FCM广域补丁鼠视网膜平面神经定位于图像底部和顶端外围,字母表示缩放区位置(b-e)。放大外围带FFOCT和CFCM相似带Tuj1染色放大接近光神经带FFOCT和e)FCM与Tuj1染色FFOCT鼠标xons明亮和细胞黑中亮轮廓比例条数:(a) 200m,(b-e) 50m
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鼠视网膜FFOCT和FCM高山市 a/广场回溯鼠视网膜平面段,视神经定位于图像底部和边缘 顶部带字母表示缩放区位置 b/- e类)高山市 b/放大外围带FFOCT C级类似区FCMTuj1染色显示轴细胞高山市 d级放大接近光神经带FFOCT e类与FCMTuj1染色显示xon捆绑FFOCT鼠类xons 明亮和单元格 黑中亮轮廓缩放栏: a/)200微米 b/- e类50微米
图4
鼠视网膜FFOCT和FCM高山市 a/广场回溯鼠视网膜平面段,视神经定位于图像底部和边缘 顶部带字母表示缩放区位置 b/- e类)高山市 b/放大外围带FFOCT C级类似区FCMTuj1染色显示轴细胞高山市 d级放大接近光神经带FFOCT e类与FCMTuj1染色显示xon捆绑FFOCT鼠类xons 明亮和单元格 黑中亮轮廓缩放栏: a/)200微米 b/- e类50微米
鼠视网膜FFOCT和FCM广域补丁鼠视网膜平面神经定位于图像底部和顶端外围,字母表示缩放区位置(b-e)。放大外围带FFOCT和CFCM相似带Tuj1染色放大接近光神经带FFOCT和e)FCM与Tuj1染色FFOCT鼠标xons明亮和细胞黑中亮轮廓比例条数:(a) 200m,(b-e) 50m
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人形、灵长类、猪类和绵羊类细胞声波显示为固灰体(高度散射)环绕黑暗(低散射)轮廓,而鼠标和鼠标则逆向反向反射(黑体和亮轮廓; 微博5)灵长类中 固灰度内含深灰核核对细胞式比在acrine细胞中大 16内含可见核细胞可置换acrine细胞顺理成章的鼠视网膜 17,18号可能主要见acrine细胞个体轴太小,无法解决鼠标和鼠标问题,尽管轴包在所有物种中被视为明亮(高度散射)结构Dentrites在任何物种中都看不到,估计因为它们太小无法解决
图5
神经纤维层和GCL区间变异全场OCT图像人型、灵长类、绵羊类、鼠类和鼠类NFL(六高板)和GCL(六低板)。大型哺乳动物和鼠类之间GCL声波反差备注,这可能是由于物种间相近交错形与acrine细胞群的差异(即暗中细胞可能对应大核acrine)比例栏:50微米
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神经纤维层和GCL区间变异全场OCT图像人类、灵长类、绵羊类、猪类、鼠类和鼠类NFL 六大板和GCL 六小板)大型哺乳动物和鼠类之间GCL声波反差备注,这可能是由于物种间相近交错形与acrine细胞群的差异(即暗中细胞可能对应大核acrine) 尺度栏:50微米
图5
神经纤维层和GCL区间变异全场OCT图像人类、灵长类、绵羊类、猪类、鼠类和鼠类NFL 六大板和GCL 六小板)大型哺乳动物和鼠类之间GCL声波反差备注,这可能是由于物种间相近交错形与acrine细胞群的差异(即暗中细胞可能对应大核acrine) 尺度栏:50微米
神经纤维层和GCL区间变异全场OCT图像人型、灵长类、绵羊类、鼠类和鼠类NFL(六高板)和GCL(六低板)。大型哺乳动物和鼠类之间GCL声波反差备注,这可能是由于物种间相近交错形与acrine细胞群的差异(即暗中细胞可能对应大核acrine)比例栏:50微米
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照片接收器图层
图6显示光受体层图像受体向上以灵长类极管网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际网际光接收器masec从神经纤维层侧穿行视网膜后也可见 补充电影S2)光受体马赛克相似解析 在其他大型哺乳动物中,上层组织解剖时最常受损,视网膜组织在光接收器层次自然分解RPE
图6
时间序列新视网膜Enface(a)跨切片(d)和缩放交叉切片(g)等值48小时解剖等值固定注意光受体波变性能 跨段图层对比序列取决于向上方组织安放常规OCT2526所见层序列以神经纤维上方图像恢复神经纤维捆绑、容器和交错细胞可见于新鲜组织中(eface剖面和对应剖面),而同值组织则会同质化和高度散射,少数纤维在固定式时可见(enface剖面),深度穿透度下降(corpse跨段)。比例条数:(a-c)20m,(d-f)100m,(g-i)20m,(j-m)100m
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时间序列新视网膜Enface系统 a/)交叉段 d级)并缩放剖面 g级)棒 圆圈和cone 星号图片接收器masec解剖高山市 b/, e类, h等值48小时解剖高山市 C级, f级, 一等值固定注意光受体波变性能 跨段图层对比序列取决于向上方组织安放数层序列见常规OCT 25码,26恢复时用神经纤维最上层神经纤维捆绑、容器和交错细胞可见于新鲜组织中 j大全并对应剖面 I级),而同一批组织变成同质高度散射,少数纤维在固定时可见 k低渗透深度 m)) 缩放栏: a/- C级20微米 d级- f级)100微米 g级- 一20微米 j大全- m)100微米
图6
时间序列新视网膜Enface系统 a/)交叉段 d级)并缩放剖面 g级)棒 圆圈和cone 星号图片接收器masec解剖高山市 b/, e类, h等值48小时解剖高山市 C级, f级, 一等值固定注意光受体波变性能 跨段图层对比序列取决于向上方组织安放数层序列见常规OCT 25码,26恢复时用神经纤维最上层神经纤维捆绑、容器和交错细胞可见于新鲜组织中 j大全并对应剖面 I级),而同一批组织变成同质高度散射,少数纤维在固定时可见 k低渗透深度 m)) 缩放栏: a/- C级20微米 d级- f级)100微米 g级- 一20微米 j大全- m)100微米
时间序列新视网膜Enface(a)跨切片(d)和缩放交叉切片(g)等值48小时解剖等值固定注意光受体波变性能 跨段图层对比序列取决于向上方组织安放常规OCT2526所见层序列以神经纤维上方图像恢复神经纤维捆绑、容器和交错细胞可见于新鲜组织中(eface剖面和对应剖面),而同值组织则会同质化和高度散射,少数纤维在固定式时可见(enface剖面),深度穿透度下降(corpse跨段)。比例条数:(a-c)20m,(d-f)100m,(g-i)20m,(j-m)100m
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组织退化超过48小时
跨段图像局部强度变异,原因是覆盖物附近有差异(即无云峰区越接近光源越亮,非云槽越暗越离光源越远; 微博6)照片接收器马赛克强度不那么统一,尽管靠近覆盖页的补丁保留初始外观整体平均强度随时间推移不变48小时周期内未检测到厚度变化耐冲峰值随时间增加强度,非耐冲槽量随时间减少引起总体对比,逐渐变差统一性
新鲜Versus固定组织
定性地说,单个光受体、粘合机和容器、神经纤维和细胞可见度下降,组织在固定状态出现更多同质和稠密性,显微镜或细胞特征较少(可见微镜或细胞特征)( 微博6)平均强度增加28%+8%固定状态对新状态 P级=0.003,上层强度提高最大,深度远比新鲜组织少见固定点测量全视距厚度缩水20%-11% P级=0.07发生于光受体层 微博7)
图7
新鲜比固定层厚度画图显示每一层厚度和NFL对RPE新鲜对比固定组织,**P < 0.01
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新鲜比固定层厚度画图显示每一层厚度和NFL对RPE新鲜对比固定组织 P级< 0.01
图7
新鲜比固定层厚度画图显示每一层厚度和NFL对RPE新鲜对比固定组织 P级< 0.01
新鲜比固定层厚度画图显示每一层厚度和NFL对RPE新鲜对比固定组织,**P < 0.01
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讨论
数种全场OCT视网膜成像显示微小细节,而在传统OCT中不可见,例如RGC轴和声波体、其他细胞体和核、三角形机、杆和锥形机FFOCT和OCT图像能辨别特征取决于分辨率(1x1x1mffFFOCT约5x15x15m因此,FFOCT新特征可见度很可能要归功于高清晰度,尽管我们承认,通过死后对散射属性的修改,某些特征对比可能增强
&#20255;&#24503;&#22269;&#38469;&#23448;&#32593;&#32593;&#22336;全场OCT成像对新组织或体外视网膜在不同时点成像可能感兴趣,因为神经纤维捆绑和细胞体不添加对比物然而,在需要识别细胞类型应用中,需要具体标签,这可以在体外实现,见原型视网膜显示 微博3&#20255;&#24503;&#22269;&#38469;&#23448;&#32593;&#32593;&#22336;或通过固定前体组织上免疫史化学标签 金字塔3, 4)&#20255;&#24503;&#22269;&#38469;&#23448;&#32593;&#32593;&#22336;FFOCT和FCM后流组织相似区合并提供细胞类型证据,尽管精确并发、复发FFOCT和荧光图像重叠只能用FFFOCT实现图像模式可证明实用应用中需要特定荧光资讯和环形组织架构概述信息
FFOC技术开发为活性视线成像,神经纤维圈和细胞密度评价和GCL可用于青光谱诊断,OCT剖面NFL目前用作GCL损耗代指针 19号,20码全场OCT可提供更精确度量该参数,如果有可能使用此技术的视网膜成像FFOCT测试角膜 5皮肤透视 21号迄今证明对视网膜成像挑战 由于缺乏高速大全水深摄像技术 和对振荡高度敏感FFOCT面向Vivo眼科成像程序正在开发中,使用定制开发CMOS相机Adimec,荷兰)和低序异常校正 22号
完全解剖后,光受体马赛克在大型哺乳动物中解析,尽管在鼠类中解析不那么清晰,可能是因为鼠类中锥体直径接近FFOCT系统解析极限杆和锥形灵长类 微博6相似外观与自适应光学扫描激光眼科 23号光接收器masec可解析视网膜上顶部和NFL顶部 补充电影S2)光接收器试管成像有希望使用此技术,视网膜保持生理状态并插入采样室,眼分解提取视网膜前插件时RPE和croid完整并附
检测标本扭曲超过48小时 表面偏移增加 降低渗透度 24码轴向和容器的可见度在固定状态下下降,光接收器masec变得模糊化,光接收器层发生重大缩水表示定型组织变化可能影响对视网膜特征和图层关联的解释,依赖与情感学或电子显微镜的关联性 25码,26
归根结底,我们已经展示FFOCT检测并显示视线层特征图像的能力,包括NFL和GCL,分辨率下降至单单元和单轴层,光受体层,清晰定义单棒和锥形全场OCT显示在新鲜体外组织样本中视网膜精确成像的潜力显示视距厚度和平均散射48小时不变,尽管组织偏向曲折固定视网膜中某些特征可见度下降,视网膜变异跨层不均匀,表示需要谨慎处理VivoOCT剖面与神学相关关系问题,这可能对视网膜命名特别重要。
感知感知
作者感谢Jens Duebel使用基因枪、Marie Darche、Sami Dalouz、ValerieFontaine和Manu Simonutti准备组织、Elisabeth Dubus和Serge Pica
由欧洲研究理事会SYNERGY赠款计划支持(HELMHOLTZ,ERC赠款协议#610110!欧理研究理事会和研究局PTS赠款(ANR-13-PRTS-009!巴黎,法国)
披露: K.格里夫无; O.千文市无; A.森古普塔市无; V.M.边疆无; M.结巴,无
引用
博尔韦尔E公司、博卡拉AC公司、LebecM公司、BlanchotL公司、Saint-Jalmes H公司全场光学一致性显微镜 OptLET.1998年23244246
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图1
中位raphe人全场OCT图像人视网膜 第二题fundus显示raphe中位区域从macula到外围一四表示NFL行近似区c列GCL比例栏:50微米
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中位raphe人全场OCT图像人视网膜 第二题高山市 a/fundus显示raphe中位区域从macula运行到外围一到四表示长相图列近似区 b/NFL行(行) C级GCL 尺度栏:50微米
图1
中位raphe人全场OCT图像人视网膜 第二题高山市 a/fundus显示raphe中位区域从macula运行到外围一到四表示长相图列近似区 b/NFL行(行) C级GCL 尺度栏:50微米
中位raphe人全场OCT图像人视网膜 第二题fundus显示raphe中位区域从macula到外围一四表示NFL行近似区c列GCL比例栏:50微米
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图2
人类视网膜交错细胞轴声广场人神经纤维层2级块:500微米FFOCT图像缩放二米厚ax比例条数:50微米补充电影S1显示轴3D
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人类视网膜交错细胞轴声高山市 a/广场人神经纤维图二 尺度栏500微米高山市 b/FFOCT图像缩放二米厚axon 箭头切换交错细胞声学并用连续2微米深度步 C级交叉单元格xon长度 缩放栏:50微米 补充电影S1显示三维内此题axons跟踪
图2
人类视网膜交错细胞轴声高山市 a/广场人神经纤维图二 尺度栏500微米高山市 b/FFOCT图像缩放二米厚axon 箭头切换交错细胞声学并用连续2微米深度步 C级交叉单元格xon长度 缩放栏:50微米 补充电影S1显示三维内此题axons跟踪
人类视网膜交错细胞轴声广场人神经纤维层2级块:500微米FFOCT图像缩放二米厚ax比例条数:50微米补充电影S1显示轴3D
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图3
全场OCT和FCM人文和FFFOCT灵长类全场OCT(左侧)和FCM(右侧)人类视网膜图像,主题三稀疏轴和细胞可见度高反射结构FFFOCT(左侧)和类似区域FCM标签Tuj1(红外)高密度打包细胞离光神经近处,该神经元、神经纤维和卷心机可见像FFOCT高反射结构(左侧)和FCM相似区域(右侧),并用Brn3a标注反射细胞核全场OCT组合Force-FFOCT中位和频频图像-GFP标签RGC视网膜实战使用Forecence-FFOCT并用像素套接比例条数:100微米
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全场OCT和FCM人文和FFFOCT灵长类高山市 a/, b/全场OCT 左转和FCM 右转人视网膜图像第三题高山市 a/稀疏轴和细胞外围可见FFOCT超反射结构 左转类似区域FCM标签Tuj1 红色标签轮廓和acrine细胞声调和axons高山市 b/高密度打包细胞离光神经近处可见FFOCT超反射结构 左转和FCM相似区域 右转交错细胞核贴上Brn3a标签 红色)高山市 C级全场OCT 左转混合荧光-FFOCT 中心点和荧光 右转GFP标签的RGC视网膜直播图像使用流频-FFOCT和像素叠加 缩放栏:100微米
图3
全场OCT和FCM人文和FFFOCT灵长类高山市 a/, b/全场OCT 左转和FCM 右转人视网膜图像第三题高山市 a/稀疏轴和细胞外围可见FFOCT超反射结构 左转类似区域FCM标签Tuj1 红色标签轮廓和acrine细胞声调和axons高山市 b/高密度打包细胞离光神经近处可见FFOCT超反射结构 左转和FCM相似区域 右转交错细胞核贴上Brn3a标签 红色)高山市 C级全场OCT 左转混合荧光-FFOCT 中心点和荧光 右转GFP标签的RGC视网膜直播图像使用流频-FFOCT和像素叠加 缩放栏:100微米
全场OCT和FCM人文和FFFOCT灵长类全场OCT(左侧)和FCM(右侧)人类视网膜图像,主题三稀疏轴和细胞可见度高反射结构FFFOCT(左侧)和类似区域FCM标签Tuj1(红外)高密度打包细胞离光神经近处,该神经元、神经纤维和卷心机可见像FFOCT高反射结构(左侧)和FCM相似区域(右侧),并用Brn3a标注反射细胞核全场OCT组合Force-FFOCT中位和频频图像-GFP标签RGC视网膜实战使用Forecence-FFOCT并用像素套接比例条数:100微米
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图4
鼠视网膜FFOCT和FCM广域补丁鼠视网膜平面神经定位于图像底部和顶端外围,字母表示缩放区位置(b-e)。放大外围带FFOCT和CFCM相似带Tuj1染色放大接近光神经带FFOCT和e)FCM与Tuj1染色FFOCT鼠标xons明亮和细胞黑中亮轮廓比例条数:(a) 200m,(b-e) 50m
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鼠视网膜FFOCT和FCM高山市 a/广场回溯鼠视网膜平面段,视神经定位于图像底部和边缘 顶部带字母表示缩放区位置 b/- e类)高山市 b/放大外围带FFOCT C级类似区FCMTuj1染色显示轴细胞高山市 d级放大接近光神经带FFOCT e类与FCMTuj1染色显示xon捆绑FFOCT鼠类xons 明亮和单元格 黑中亮轮廓缩放栏: a/)200微米 b/- e类50微米
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鼠视网膜FFOCT和FCM高山市 a/广场回溯鼠视网膜平面段,视神经定位于图像底部和边缘 顶部带字母表示缩放区位置 b/- e类)高山市 b/放大外围带FFOCT C级类似区FCMTuj1染色显示轴细胞高山市 d级放大接近光神经带FFOCT e类与FCMTuj1染色显示xon捆绑FFOCT鼠类xons 明亮和单元格 黑中亮轮廓缩放栏: a/)200微米 b/- e类50微米
鼠视网膜FFOCT和FCM广域补丁鼠视网膜平面神经定位于图像底部和顶端外围,字母表示缩放区位置(b-e)。放大外围带FFOCT和CFCM相似带Tuj1染色放大接近光神经带FFOCT和e)FCM与Tuj1染色FFOCT鼠标xons明亮和细胞黑中亮轮廓比例条数:(a) 200m,(b-e) 50m
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图5
神经纤维层和GCL区间变异全场OCT图像人型、灵长类、绵羊类、鼠类和鼠类NFL(六高板)和GCL(六低板)。大型哺乳动物和鼠类之间GCL声波反差备注,这可能是由于物种间相近交错形与acrine细胞群的差异(即暗中细胞可能对应大核acrine)比例栏:50微米
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神经纤维层和GCL区间变异全场OCT图像人类、灵长类、绵羊类、猪类、鼠类和鼠类NFL 六大板和GCL 六小板)大型哺乳动物和鼠类之间GCL声波反差备注,这可能是由于物种间相近交错形与acrine细胞群的差异(即暗中细胞可能对应大核acrine) 尺度栏:50微米
图5
神经纤维层和GCL区间变异全场OCT图像人类、灵长类、绵羊类、猪类、鼠类和鼠类NFL 六大板和GCL 六小板)大型哺乳动物和鼠类之间GCL声波反差备注,这可能是由于物种间相近交错形与acrine细胞群的差异(即暗中细胞可能对应大核acrine) 尺度栏:50微米
神经纤维层和GCL区间变异全场OCT图像人型、灵长类、绵羊类、鼠类和鼠类NFL(六高板)和GCL(六低板)。大型哺乳动物和鼠类之间GCL声波反差备注,这可能是由于物种间相近交错形与acrine细胞群的差异(即暗中细胞可能对应大核acrine)比例栏:50微米
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图6
时间序列新视网膜Enface(a)跨切片(d)和缩放交叉切片(g)等值48小时解剖等值固定注意光受体波变性能 跨段图层对比序列取决于向上方组织安放常规OCT2526所见层序列以神经纤维上方图像恢复神经纤维捆绑、容器和交错细胞可见于新鲜组织中(eface剖面和对应剖面),而同值组织则会同质化和高度散射,少数纤维在固定式时可见(enface剖面),深度穿透度下降(corpse跨段)。比例条数:(a-c)20m,(d-f)100m,(g-i)20m,(j-m)100m
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时间序列新视网膜Enface系统 a/)交叉段 d级)并缩放剖面 g级)棒 圆圈和cone 星号图片接收器masec解剖高山市 b/, e类, h等值48小时解剖高山市 C级, f级, 一等值固定注意光受体波变性能 跨段图层对比序列取决于向上方组织安放数层序列见常规OCT 25码,26恢复时用神经纤维最上层神经纤维捆绑、容器和交错细胞可见于新鲜组织中 j大全并对应剖面 I级),而同一批组织变成同质高度散射,少数纤维在固定时可见 k低渗透深度 m)) 缩放栏: a/- C级20微米 d级- f级)100微米 g级- 一20微米 j大全- m)100微米
图6
时间序列新视网膜Enface系统 a/)交叉段 d级)并缩放剖面 g级)棒 圆圈和cone 星号图片接收器masec解剖高山市 b/, e类, h等值48小时解剖高山市 C级, f级, 一等值固定注意光受体波变性能 跨段图层对比序列取决于向上方组织安放数层序列见常规OCT 25码,26恢复时用神经纤维最上层神经纤维捆绑、容器和交错细胞可见于新鲜组织中 j大全并对应剖面 I级),而同一批组织变成同质高度散射,少数纤维在固定时可见 k低渗透深度 m)) 缩放栏: a/- C级20微米 d级- f级)100微米 g级- 一20微米 j大全- m)100微米
时间序列新视网膜Enface(a)跨切片(d)和缩放交叉切片(g)等值48小时解剖等值固定注意光受体波变性能 跨段图层对比序列取决于向上方组织安放常规OCT2526所见层序列以神经纤维上方图像恢复神经纤维捆绑、容器和交错细胞可见于新鲜组织中(eface剖面和对应剖面),而同值组织则会同质化和高度散射,少数纤维在固定式时可见(enface剖面),深度穿透度下降(corpse跨段)。比例条数:(a-c)20m,(d-f)100m,(g-i)20m,(j-m)100m
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图7
新鲜比固定层厚度画图显示每一层厚度和NFL对RPE新鲜对比固定组织,**P < 0.01
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新鲜比固定层厚度画图显示每一层厚度和NFL对RPE新鲜对比固定组织 P级< 0.01
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新鲜比固定层厚度画图显示每一层厚度和NFL对RPE新鲜对比固定组织 P级< 0.01
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