查询和解析法减少人类表面寄生细胞的炎和氧化响应 - BET TOR伟德,伟德官网下载地址苹果

抽象性

目标:确定quercetin和/或Resertra

方法论:IOBA-NHC和HCE细胞用QCT处理(0.5-25微米)、ERS处理(0.5-50微米)并用低调QCT混合处理(0.5微米)和RES5微米(QCT+RES)并用TNF-AL或紫外线-BCytokine生产量(IL-6、IL-8、IP-10和VEGF)用免损珠阵列分析,细胞内活性氧种生产量由H判定₂DCF-DA染色解析

结果:IOBA-NHC和HCE用TNF-AL诱导增加IL-6、IL-8和IP-10分解两行Querestin和Res下降IL-6和IP-10分解Interleukin-8分解在HCE中也以依赖剂量方式禁止,但在IOBA-NHC和HCE中仅在20和25mQCT和50mERSQCT+RES下降IL-6和IL-8分解P级< 0.01和P级union-NHC单元紫外线-B诱导两行ROS大幅增加P级< 0.01和P级IOBA-NHC和HCEIOBA-NHC细胞活性氧种类生产受抑制P级< 0.05)x50mres

结论:Querictin和Rese对IOBA-NHC和HCE细胞有防炎和抗氧化效果体外数据显示,双酚在治疗炎性表面疾病方面可能具有治疗潜力

干眼病、严重过敏或基于免疫的复发性结膜炎等不易染色体病,由于其高流行率而成为日益严重的保健问题 ^一号伟德国际官网网址并能力影响病人生活质量、工作相关问题和保健资源 ^2,3防炎和免疫抑制复合物被视为控制这些疾病背后的煽动性级联的药法代理物重度DED可选解法Cortcosteroids和BenosporineA持久热电机处理产生目光长期副作用(即青光眼和白内障) ^4,5环球A并非所有国家都可用,因为只有部分国家才批准使用环球A此外,炎症并非参与这些进程的唯一机制。氧化性应激标记增加证明DED并发 ⁶并发病人 ⁷或视觉过敏 ⁸正因如此,人们越来越有兴趣寻找新的局部治疗替代方法来治疗慢性肿瘤表面病

近十年来,越来越多的证据表明食源植物多酚(如菜类素和类素)的潜在健康惠益,因为它们生物特性如抗氧化剂和防炎复合物 ^九九

Quercetin (3,3′,4′,5,7-pentahydroxyflavone!素材多芬式复合体见诸苹果树类树类树类树类树类树类果类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类树类和树类树类树类树类树类树类树类树类数项体外和体外研究支持它作为抗癌性、抗病毒性、心电保护性以及神经保护性复合物 ^10,11特别是QCT以抗氧化能力闻名,它是最有效的自由激进清扫者之一 ¹²并防炎活动 ¹³

Trans-resveratrol (trans-3,4′,5-trihydroxystilbene!RES)是多种饮食源中发现的非菜类多芬式复合物,如葡萄树、木莓果、花生和红酒ARES受欢迎来源于所谓的法国自相矛盾,高脂肪饮食与红酒消费引起的低冠心病发病率之间逆相关 ¹⁴与QCT相似,它已广泛证明生物效果为神经防护性、心形防护性及抗癌性 ^15-18号并防炎和抗氧化物复合 ^19号,20码

目前,对自然生成多酚可能的健康益益的兴趣增加,因为它们有可能对几类疾病产生抗炎和抗氧化物作用,如囊炎和高血压 ^21号,22号某些研究解决了RES在某些眼炎病理中的影响问题,如内分毒诱发Uveitis鼠标模型 ^23号然而,据我们所知,没有研究QCT和RES对视觉表面疾病的影响因此,本研究的目的是确定QCT抗炎和抗氧化效果以及两种复合物(QCT+RES)对视觉表皮细胞的组合 ^24码和(2)紫外线-B光诱氧化应力 ^25码多酚的毒性及其对细胞表面分治作用(Interleukin6、IL-8、插取CPI-IP-10和脉冲内延生长因子-VEGF)和细胞内活性氧种生成

材料方法

素材类

试剂从下列供应商购买ulbecco修饰EagleM/NutrietF-12(DM/F-12)、amarBlue细胞可行性解析和4-2-Hicroy乙基-I-improzine乙烷硫酸(HEPES)来自Invitrogen(Inchinnan,UK)塑料文化盘来自Nunc(Roskilde,丹麦)乙醇(ETOH)和D-Glucose都来自Panreac(西班牙巴塞罗那市)ytokineTNF-A来自PeprotechECRES、QCT、DMEM ₃红色2+7+-二氯二氟化二乙酸 ₂DCF-DA、L-gluteine、FBS、Hosco毒素、EGF、Vovine insulin、penicllin、steptomycin、fugizone、hycortosone和二甲基二亚二亚标准数Louis,MO,USA)双叉酸解析取自TermoFishScience(Rockford,IL,USA)。

细胞线文化

两种不同的视觉表面隐形细胞线IOBA-NHC和HCE用于这些实验

IOBA-NHC(正常人并发)细胞线系非传输自发不死单数细胞线系取自正常人并发 ²⁶IOBA-NHC细胞用DMEM/F12L-glutam补充10%FBS、0.1mg/mlHoseurose、2ng/mlEGF、1mg/mlbovine insulin、5000U/mLpicillin、5mg/mlsteptomycin、2.5mg/ml62至72段使用

人角膜单片线SV40模拟人角膜单片线 ^27号Arto Urti(芬兰赫尔辛基大学)HCE细胞用DMEM/F12L-glutime补充15%FBS、0.5%DMSO、0.1mg/mlHose从45号到55号通道使用

两条细胞线在37摄氏度以5%CO ₂95%空气媒体隔天换换,并用相向显微镜每日观察

显示细胞培养媒体在多酚体外测试时起关键作用 ^28码一方面,某些培养介质组件,如单碳酸钠 ₃)可降解并减少多酚含量 ^29,30码另一方面,细胞培养介质通常含有许多潜在的抗氧化物化合物,如回文和酚红色,这可能干扰测试复合物的抗氧化能力。 ^31-34号为了避免细胞培养介质中的这些文物,所有实验都用DMEM培养介质进行,没有 NaHCO ₃红加315g/LD-glucose2mmL-glutoine2mmmmmmmHEPES25mMHEPES

编译聚苯酚解决方案

EtOH新储量QCT和RES解决方案为每次实验准备后进行串行稀释以最终富集度介于0.5至25mQCT和0.5至300mRES组合0.5微米QCT和5微米RES所有解决方案都以这样一种方式编译,即当多酚加到井中时,飞行器在所有样本中最终富集率为0.5%(单行无毒,数据不显示)。

循环毒性解析

QCT和Res对上皮细胞的毒性经amar蓝测试评估IOBA-NHC和HCE细胞用96well板播种并生长到90%预感后用无血清非补充介质维护24小时那时媒体被清除,细胞用QCT(1、5、10、1520和25m)或RES(1、5、10、25、50、100、150和300m)的不同富集度处理,并在37摄氏度时嵌入24小时控制细胞用车处理孵化后,超生体被丢弃,并添加10%amarBlue并配制DMEM/F12补充培养介质细胞在37摄氏度嵌入4小时最终从每个样本采集介质,560纳米测量荧光 _前590纳米 _模组UV/Vis光谱测量分子设备公司Sunnyvale公司,CA公司,USA氯化物(0.005%)用作正控件(数据未显示)。进行了三次独立实验,测量结果取自8项复制件,每个条件研究

细胞切片活化和聚苯酚处理

IOBA-NHC和HCE细胞用24well板播种并生长到90%预感后用无血清非补充介质维护24小时时段清除媒体并预处理电池二小时37摄氏度时使用QCT(0.5、1、5、10、1520和25微米)、RES(0.5、5、10、25和50微米)、QCT+RES(0.5微米QCT+5微米RES)或车辆2小时处理之后预处理代理程序删除电池用25纳克/毫拉TNF-A并有QCT、RES、QCT+RES或车辆(0.5%EtOH)并孵化24小时无动于衷细胞使用多酚处理,但没有TNF-A处理期后,附条件介质采集并离心机为59 g级5分钟超级目录和嵌入式细胞板存储到-80摄氏度直至使用三次独立实验重复进行

ytokine/ Chemokine保密度量

ytokine/chemokine分解用前文描述的Luminexx-MAP复用波束技术多路数组评估 ^24码Interleukin-6、IL-8、IP-10和VEGF水平均用商业Mlipsle四维人体细胞素/chokine免疫测试判定细胞超级测试法(HCYTO!Millipore,Watford,UK),根据制造商指令简言之,每样样本中25微升细胞超导体在4摄氏度通宵带抗体阻塞珠盘96well内孵化珠子冲洗并注入生物基细胞/化学反机解析法1小时室温,然后用strevavidin-phyerthrin孵化30分钟室温Luminex公司、Oustin公司、TX公司、USA已知重聚人体细胞/化学元件标准曲线用于将荧光元转换为细胞/化学元件(pg/ml)。每种细胞素/化学素最低可检测量IL-6为0.3皮克/mL,IL-8为0.2皮克/mL,IP-10为1.2皮克/mL,VEGF为5.8皮克/mL细胞移植水平无法检测时,分析使用最小可检测水平数据用BeadView软件分析(Upstate,Uk总蛋白用BCA蛋白解析 ^35码内嵌单元格按制造商指令

活性Oxygen物种生成测量

细胞内部ROS通过UV-B接触上皮细胞使用H评估 ₂DCF-DA染色非发光染色化成细胞并分解为H ₂DCF切分细胞非浮点H ₂DCF通过细胞内ROS快速氧化DCF

IOBA-NHC和HCE细胞以配制介质制成24+盘直到90%预感后用无血清非补充介质维护24小时之后媒体被清除,细胞预处理QCT(0.5、1、5、10和25微米)、RES(0.5、5、10和50微米)、QCT+RES(0.5mQCT+5微米RES)或车辆预处理1小时37摄氏度那时超生机被丢弃细胞装H ₂DCF-DA添加500微L10微MH ₂DCF-DA解析法并注入30分钟H级 ₂DCF-DA解析细胞用QCT、RES、QCT+RES或车辆处理(0.5%EtOH),富集度与前用值相同并接触8WUV-B灯距离UV-B辐射电密度为7.15mW/cm ²表示制造厂商Bio-Rad公司、Hoclece公司、CA公司、USA电池从井底照射15秒以避免多酚在培养媒体中吸收UV-B15秒后UV-B光照107.25mJ/cm ²计算公式 H级= E级· t级中位 H级光线照射 ²) E级即为辐照性 ²)和 t级即接触时间控制单元没有辐照UV-B接触后,细胞培养1小时,然后细胞内荧光强度测量为488纳米 _前522纳米 _模组specraxM5UV/Vis分光谱计使用样本中的流频数据归并到相应的总蛋白质中,由CBA蛋白检测包测量细胞内荧光强度后确定进行了三次不同的实验,样本复制

统计分析

所有数据表示平均++标准误差统计分析使用SPSS软件包(Windows为SPSS15.0版!SPSS公司,美国IL芝加哥相异性使用Levene测试分析上头 t级测试或 t级使用Welch校正测试比较非刺激细胞和促动细胞,用Dunnett后期测试或Howell单向分析法比较组间比较双向 P级值等于或小于0.05被认为具有统计意义

结果

聚苯酚的毒性

为了测试多酚的细胞毒性,细胞24小时接触QCT和RES的不同富集度图1IOBA-NHC显示QCT和RES的细胞毒性金字塔2A级 2B级和HCE级金字塔2C 2手机线路Querestin测试时没有降低细胞共生或角膜上皮细胞的可生存性关于RES检测浓度,只有300微米Rece引起两行细胞可行性显著下降,HCE电池效果高于IOBA-NHC电池效果

图1

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quecetin和Resertrarol对IOBA-NHC和HCE细胞的毒性效果细胞用QCT处理(1、5、10、1520和25微米)、RES(1、5、10、25、50、100、150和300微米)或车辆处理(0.5%乙醇)并孵化24小时循环毒性使用amarBlue测试确定测试的QCT浓度无一对IOBA-NHC(IOBA-NHC)都有毒 A级或HCE C级)细胞,而IOBA-NHC(IOBA-NHC)仅有300微米RES毒 B级和HCE D级)细胞数据显示为三次独立实验++SEM的相对荧光单元* P级< 0.05,*** P级<0.001,与用车处理的细胞相比

图2

quecetin和reveratrol对IOBA-NHC细胞预处理二小时半QCT(0.5、1、5、10、15、20、25微米)、RES(0.5、5、10、25和50微米)或车辆(0.5%乙醇)。其后用25纳克/毫拉TNF-A处理电池并用QCT、RES或车辆处理并嵌入24小时(黑方块)。无动于衷细胞用多酚处理,但没有TNF-A使用x-MAP复用珠子技术进一步采集分析iL-6、IL-8、IP-10和VEGF水平QCT下调TNF-AL刺激IL-6、IL-8和IP-10分解RES下调TNF-AL刺激IL-6、IL-8和IP-10分解,分别为25微M(E)、50微M(F)和10微M(G)。TNF-A不刺激IOBA-NHC细胞分解数据显示为三次独立实验++SEM解析到总蛋白微克P < 0.05,**P < 0.01,***P < 0.001,对比控制单元+P < 0.05,++P < 0.01,++P < 0.001

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quecetin和reveratrol对IOBA-NHC细胞预处理二小时半QCT(0.5、1、5、10、15、20、25微米)、RES(0.5、5、10、25和50微米)或车辆(0.5%乙醇)。其后用25纳克/毫拉TNF-A并用QCT、RES或车辆处理并嵌入24小时黑方)无动于衷细胞使用多酚处理,但没有TNF-A 白环)使用x-MAP复用珠子技术进一步采集分析iL-6、IL-8、IP-10和VEGF水平QCT下降TNF-AL模拟IL-6、IL-8和IP-10分解 A级20微米 B级和10微米 C级),并二选一ES下降TNF-AL模拟IL-6、IL-8和IP-10分解 E级),50微M F级和10微米 G级),并二选一TNF-A不刺激IOBA-NHC细胞分解 D级, H级)数据显示为三次独立实验++SEM解析到总蛋白微克* P级< 0.05,** P级< 0.01,*** P级< 0.001,对比控制单元; ⁺ P级< 0.05 ⁺⁺ P级< 0.01 ⁺⁺⁺ P级< 0.001,与用车处理电解槽比较

聚酚对TNF-A

为了调查QCT(0.5-25微米)和RES(0.5-50微米)对并发细胞和角膜膜分解的非毒性作用,确定了其对TNF-A导出细胞细胞/chemokine分解的影响

图2多酚对IL-6、IL-8、IP-10和VEGFIOBA-NHC分解效果Querestin显著下降IL-6、IL-8和IP-10分解金字塔2A- 2反射分解图NF-AL模拟IL-6、IL-8和IP-10分解数分别为25、50和10m 金字塔2E- 2G.)

图3显示QCT和Res对IL-6、IL-8、IP-10和VEGFHCE分解效果QCT显著下降IL-6-IL-8-IP-10分解金字塔3A- 3ARS下降IL-6-IL-8-IP-10分解金字塔3E- 3G.)

图3

quecetin和Reveratrol对HCETNF-ALA诱发细胞素释放效果细胞预处理二小时半QCT(0.5、1、5、10、15、20、25微米)、RES(0.5、5、10、25和50微米)或车辆(0.5%乙醇)。其后用25纳克/毫拉TNF-A处理电池并用QCT、RES或车辆处理并嵌入24小时(黑方块)。无动于衷细胞用多酚处理,但没有TNF-A使用x-MAP复用珠子技术进一步采集分析iL-6、IL-8、IP-10和VEGF水平QCT稀释IL-6、IL-8和IP-10分解RES下调ITL-6、IL-8和IP-10分解值分别为10m(E)、50mM(F)和0.5mTNF-A不刺激VEGF分解HCE细胞(DH)。数据显示为三次独立实验++SEM解析到总蛋白微克P < 0.05,**P < 0.01,***P < 0.001,对比控制单元+P < 0.05,++P < 0.01,++P < 0.001

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quecetin和Reveratrol对HCETNF-ALA诱发细胞素释放效果细胞预处理二小时半QCT(0.5、1、5、10、15、20、25微米)、RES(0.5、5、10、25和50微米)或车辆(0.5%乙醇)。其后用25纳克/毫拉TNF-A并用QCT、RES或车辆处理并嵌入24小时黑方)无动于衷细胞使用多酚处理,但没有TNF-A 白环)使用x-MAP复用珠子技术进一步采集分析iL-6、IL-8、IP-10和VEGF水平QCT下降TNF-AL模拟IL-6、IL-8和IP-10分解 A级5微米 B级)和1m C级),并二选一ES下降TNF-AL模拟IL-6、IL-8和IP-10分解 E级),50微M F级和0.5mTNF-A不刺激VEGF分解HCE细胞 D级, H级)数据显示为三次独立实验++SEM解析到总蛋白微克* P级< 0.05,** P级< 0.01,*** P级< 0.001,对比控制单元; ⁺ P级< 0.05 ⁺⁺ P级< 0.01 ⁺⁺⁺ P级< 0.001,与用车处理电解槽比较

25纳克/毫拉TNF-A不刺激IOBA-NHC或HCE分解VEGF

并测试两种复合物的防炎效果微博4)组合QCT+RES(0.5微米QCT和5微米RES)基于剂量-响应曲线选择,因为两种聚积分解对细胞线/化学释放不产生任何显著效果

图4

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quecetin和Resertral对IOBA-NHC和HCE单元TNF-Agent细胞释放效果双行预处理0.5微米QCT、5微米RES、0.5微米QCT+5微米RES或车辆(0.5%乙醇)2小时其后用25纳克/毫拉TNF-A并用QCT、RES、QCT+RES或车辆浸泡24小时处理无动于衷细胞使用多酚处理,但没有TNF-A使用x-MAP复用珠子技术进一步采集分析iL-6、IL-8、IP-10和VEGF水平关于IOBA-NHC单元,QCT+RES减少TNF-AST推理IL-6分解多于QCT分解 A级)QCT+RES和两种复合物对INF-AL模拟IL-8和IP-10IOBA-NHC分解 B级, C级)TNF-A不刺激VEGF分解,QCT和QCT+RES在IOBA-NHC单元TNF-A下显著降低VEGF水平 D级)HCE单元格QCT+RES和两种复合物之间没有重大差异,可分析任何细胞素级数据显示为三次独立实验++SEM解析到总蛋白微克* P级< 0.05,** P级< 0.01,*** P级< 0.001,对比控制单元; ⁺ P级< 0.05 ⁺⁺ P级< 0.01,与车辆处理电解槽比较

关于IOBA-NHC细胞,两种复合QCT+RES对TNF-Assti 微博4A).组合QCT+RES还大幅下降TNF-AL刺激IL-8生产量,但这一下降量与用0.5mQCT处理的细胞相似微博4)TNF-A+S处理IOBA-NHC细胞时未发现有显著差异微博4C)级指HCE单元时,组合QCT+RES对TNF-AL诱导IL-6、IL-8、IP-10和VEGF分解作用不大金字塔4E- 4H)

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